- 美国DRIERITE目录-DRI...
- 美国Nationaldiagno...
- 美国Electron Micro...
-
美国电镜耗材总目录
-
脑矩阵
-
标样
-
碳/石墨棒
- 清洁用品
-
钻石刀
-
TEM支持膜
- 胶黏剂非导电 胶黏剂导电
-
烧杯
-
原子力显微镜用品
-
AFM探针
- 防静电产品
- 胶黏剂产品
-
铜网、镍网和金网
- Adhesives 胶粘剂 粘合...
-
Apertures 光圈孔径
-
Atomic Force Mic...
-
Beakers 烧杯
-
Brushes 生物刷
-
Calibration 校准产品
-
Carbon / Graphit...
-
Cleaning 清洁产品
-
Dissection Suppl...
-
Filaments / Cath...
-
Embedding Suppli...
-
Forensic 法医产品
-
FIB Supplies 纤维...
-
Grids 电镜网格系列
-
Materials Scienc...
-
Omniprobe Consum...
-
Scanning Electro...
-
Tweezers 镊子
-
Tools 工具
-
脑矩阵
-
KOVA公司产品
- 美国EIS
- 美国Tronex
-
APPLIED MICROARR...
- Drummondsci
- 美国PrimCells公司
- 美国Vector目录-Vecto...
-
美国VWR目录-VWR Cata...
-
General Catalogu...
- Adhesives-Autora...
- Bags-Barometers ...
- Baths-Blenders 水...
- Bottles 试验瓶
- Brushes-Casserol...
- Centrifuges-Chlo...
- Chromatography 层...
- Clamps-Cylinders...
- Data Loggers-Ele...
- Electrophoresis ...
- Electroporators-...
- Filters-Flashlig...
- Flasks-Furnaces ...
- Gas-Heating Tape...
- Hemacytometers-H...
- Humidity-Ice Mak...
- Incubators-Melti...
- Microbiology Med...
- Microscopes-Mill...
- Molecular Biolog...
- Ovens-Petroleum ...
- pH-Photometers 酸...
- Pipets-Pipettors...
- Plates-Rulers 酶标...
- Safety, Air Moni...
- Safety, Hearing ...
- Sample Cups-Spec...
- Spectrophotomete...
- Standards 标准液
- Stationery-Stopp...
- Surface Tension-...
- Thermometers-Tim...
- Tissue-Tubes,NMR...
- Tubing-Valves 导管...
- Vials-Watch Glas...
- Water Purificati...
-
Chemical Catalog...
- Acacia to Alumin...
- Amine-Sulfuric A...
- Balsam Canada So...
- Cacodylic Acid, ...
- Deblock Reagent ...
- Ecolite to Furfu...
- D-(+)-Galactose ...
- Imidazole to Lys...
- Magnesium to Myr...
- Naphthalene to 2...
- Palladium (II) A...
- Potassium Acetat...
- Saccharin Sodium...
- Sorbic Acid to S...
- TAE Buffer to Tr...
- Universal Indica...
-
Life Science Cat...
- Air-Antibodies 压...
- Apoptosis Reagen...
- Autoradiography-...
- Blotting-Bottles...
- Cell Cycle Reage...
- Centrifuges-Comb...
- Competent Cells ...
- Conductivity-Dia...
- DNA Synthesis Re...
- Electrophoresis-...
- Enzymes 酶
- Evaporators-Free...
- Fume Hoods-Histo...
- Homogenizers-Loo...
- Microscopes/Slid...
- Molecular Biolog...
- Nitric Oxide Rea...
- Peptide Synthesi...
- Petri-Photodocum...
- Pipetting 吸液管
- Plate Readers-Pl...
- Reagents, Specia...
- Refrigerators-Th...
- Tissue-Wipers 组织...
-
General Catalogu...
- 美国MatTek Corpora...
-
美国Nasco Whirl-Pa...
-
Whirl-Pak圆底采样袋
-
Whirl-pak耐高温采样袋
-
Whirl-Pak大肠菌群采样袋
-
Whirl-Pak均质袋
-
Whirl-Pak黑色采样袋
-
Whirl-Pak无菌采样袋(附...
-
Whirl-Pak可放置标牌的无...
-
Whirl-Pak防辐射采样袋
-
Whirl-Pak带泡沫采样袋
-
Whirl-Pak长期保存样品袋
-
Trans-Pak取样袋,带生物...
-
Whirl-Pak可标记宽钢丝封...
-
Whirl-Pak直立含硫代硫酸...
-
Whirl-Pak大容积采样袋
-
Whirl-Pak均质过滤袋
-
Whirl-Pak表面测试采样袋...
-
Whirl-Pak无菌水质采样袋
-
Whirl-Pak可直立圆底采样...
-
Whirl-Pak带标签无菌采样...
-
Whirl-Pak标准无菌采样袋
- Whirl-Pak®Bags 美...
-
Whirl-Pak圆底采样袋
- Berkshire
- 美国CORNING目录-CORN...
-
美国(Thermo Fisher...
-
**组化笔—PAP PEN
-
Thermo玻片-Thermo ...
- Fisher玻片-Fisher ...
- VWR玻片-VWR Slide
-
Corning玻片
-
NUNC玻片目录- NUNC C...
-
紫外光谱相关-UV spectr...
-
HAMILTON进样器-HAMI...
-
计时器-Timer
-
游标式瓶口分配器-Cursor-...
-
AMPULES安瓿瓶-Ampou...
-
袋子-Bags
-
称量用品-Weighing Pr...
-
烧杯-Beaker
-
实验台保护垫-Test bed ...
-
试剂瓶-Reagent bott...
-
滴定管-Buret
-
游标卡尺-Calipers
-
试剂桶-Reagent barr...
-
夹子和台架-Clip and S...
-
储样-Sample storag...
-
坩埚-Crucible
-
冻存-Cryopreservat...
-
量筒-Graduated cyl...
-
平皿-Plate
-
过滤产品-Filtration ...
-
烧瓶-Flask
-
容量瓶-Volumetric f...
-
地粘-stick
-
镊子-Forceps
-
漏斗-Funnel
-
玻璃割刀-Glass cutte...
-
手套-Gloves
-
组织学用具-Histology ...
-
冰盒-Ice box
-
标签带-Label with
-
微生物取样-Microbial ...
-
微量板-Micro plate
-
显微镜耗材-Microscope...
-
玛瑙研钵-Agate morta...
-
支架-Support
-
**用品-Safety Prod...
-
取样器-Sampler
-
剪刀-Scissors
-
标准筛-Standard sie...
-
抹刀-Spatula
-
磁力搅拌子-Magnetic s...
-
胶塞-Stopper
-
组织培养-Tissue Cult...
-
夹子-Clip
-
分配盘/托盘-Distribut...
-
管子-Tube
-
样品小瓶-Sample vial
-
利器存储桶-Tool bucke...
-
实验室用抹布-Laborator...
-
封口膜-Sealing film
-
移液管及**装置-Pipette...
-
移液枪-Pipette
-
**组化笔—PAP PEN
- 美国BD 公司产品
- 美国Nalgene 生物耗材
- **新品-New Product...
- VWR目录-VWR Catalo...
-
Corning目录-Cornin...
-
Millipore仪器耗材-Mi...
-
Merck试剂耗材-Merck ...
-
Whatman试剂耗材-What...
-
Axygen试剂耗材-Axyge...
- SAI-infusion
- ASI-instruments
-
PALL仪器耗材-Pall Ca...
- 细胞目录-Cell Lines
- 美国 Cell Marque
- Hamilton
- 菌株 菌种库 微生物菌种
-
NU-CHEK
- ATCC细胞 细胞株 肿瘤细胞
- 丹麦NUNC全目录
使用ProtoGel30%进行电泳实验的使用及配比说明
丙烯酰胺:甲叉丙烯酰胺:37.5:1
纯稳定的溶液
SDS-PAGE电泳实验的方法
1.Laemmli SDS-PAGE凝胶配方
使用下表来确定配置不同百分比凝胶需要的试剂量。如果您电泳的凝胶百分比未包括在该表中,使用下面的公式来计算ProtoGel、ProtoGel配套的缓冲液以及其他试剂的需要量。
常用凝胶百分比中各溶液成分的量 使用预混的4X Resolving Buffer 或 1.5 M Tris-HCl |
||
凝胶% |
4X Resolving Buffer |
1.5 M Tris-HCl |
6% |
ProtoGel 30%: 20.0ml 4X Resolving Buffer: 25.0ml 去离子水: 53.9ml |
ProtoGel 30%: 20.0ml 1.5 M Tris-HCl, pH 8.8: 25.0ml 10% SDS: 1.0ml 去离子水: 52.9ml |
8% |
ProtoGel 30%: 26.7ml 4X Resolving Buffer: 25.0ml 去离子水: 47.2ml |
ProtoGel 30%: 26.7ml 1.5 M Tris-HCl, pH 8.8: 25.0ml 10% SDS: 1.0ml 去离子水: 46.2ml |
10% |
ProtoGel 30%: 33.3ml 4X Resolving Buffer: 25.0ml 去离子水: 40.6ml |
ProtoGel 30%: 33.3ml 1.5 M Tris-HCl, pH 8.8: 25.0ml 10% SDS: 1.0ml 去离子水: 39.6ml |
12% |
ProtoGel 30%: 40.0ml 4X Resolving Buffer: 25.0ml 去离子水: 33.9ml |
ProtoGel 30%: 40.0ml 1.5 M Tris-HCl, pH 8.8: 25.0ml 10% SDS: 1.0ml 去离子水: 32.9ml |
15% |
ProtoGel 30%:50.0ml 4X Resolving Buffer: 25.0ml 去离子水: 23.9ml |
ProtoGel 30%: 50.0ml 1.5 M Tris-HCl, pH 8.8: 25.0ml 10% SDS: 1.0ml 去离子水: 22.9ml |
· 注:ProtoGel Resolving Buffer的使用量总是一样的,无论凝胶中单体的百分比是多少(每100ml凝胶灌制液中固定添加25mlProtoGel Resolving Buffer)。
配置任何体积浓度的凝胶灌制液中所需ProtoGel的量都可以由下列公式计算:
Vp =(X) (Vt)/30
这里,Vp = 30% ProtoGel的量,X = 凝胶中所需的单体的百分比,Vt = 灌制液的总量
比如:制作100ml单体10%的凝胶,计算要添加的ProtoGel的量如下所示:
Vp = (10) (100)/30 = 33.3 ml
2.添加引发剂和灌制胶
为了达到好的实验效果,在使用引发剂APS以及TEMED之前花10分钟真空脱除凝胶溶液中的气体。每100ml灌制液加入1.0ml10%(W/V)的过硫酸胺轻摇混合,之后每100ml灌制液加入0.1ml的TEMED轻摇混合,将溶液倾入凝胶灌制盒中,凝胶应该在10-20分钟之间开始凝固。为了避免形成不平的界面,在聚合凝固之前加入正丁醇饱和的水溶液压平界面。在灌制浓缩胶(具体操作见下一节)之前,用水将丁醇冲洗掉。
3.灌注浓缩胶
使用ProtoGel Stacking Buffer配制10ml4%的浓缩胶:ProtoGel: 1.3ml,ProtoGel Stacking Buffer: 2.5ml,去离子水: 6.1ml。加入0.05ml10%过硫酸铵和0.01ml 的TEMED,凝胶将开始在20分钟内开始凝固。
注:可以使用0.5M Tris-HCl, 0.4% SDS, pH 6.8的溶液替代ProtoGel Stacking Buffer。
4.选择电泳缓冲液
Laemmli SDS-PAGE:对大多数SDS-PAGE电泳实验来说,1X Tris-甘氨酸SDS是适合的电泳槽缓冲液。
小分子量SDS-PAGE (< 20kD):National Diagnostics公司独特的Tris-**基甘氨酸-SDS电泳缓冲液有效分离较小的蛋白质,而无需完全遵循Schagger- Von Jagow的方法。
ProtoGel使用**提示
风险:可能致癌。可能引起遗传性基因损害,此外与皮肤接触及吞食均有毒。长期吸入、与皮肤接触或者误吞都会对健康产生严重危害。
确保**:避免直接接触,使用前需获取**指导。如有意外发生或感觉不适,请立即就医。
电泳实验过程中可与ProtoGel 30%相配套使用的产品及其货号
产品名称 |
产品货号 |
ProtoGel 30% 蛋白凝胶 |
EC-890 |
4X Resolving Buffer 分离胶缓冲液 |
EC-892 |
4X Stacking Buffer 浓缩胶缓冲液 |
EC-893 |
10X Tris Glycine SDS 电泳缓冲液 |
EC-870 |
10X Tris Tricine SDS 电泳缓冲液 |
EC-869 |
Protein Loading Buffer Blue 2X 蛋白上样缓冲液(蓝色) |
EC-886 |
APS |
EC-504 |
TEMED |
EC-503 |
原英文版PDF https://www.nationaldiagnostics.com/sites/default/files/ec890_protocol.pdf